top of page
חיפוש

מדריך פיפטציה - הנחיות שימוש בפיפטורים למעבדה

מדריך פיפטורים במעבדה - הנחיות שיכולות לסייע לשיפור רמת הדיוק של טיפול בנוזלים.



פיפטורים לשימוש במעבדה


כמו שף שמשתמש בסכין, מדען במעבדה צריך כישורי פיפטציה (חלוקת נוזלים). שף ותיק יכול לחתוך גזר לרצועות לכאורה בלי מחשבה, אבל אף פעם לא מזיק לזכור כמה הנחיות בסיסיות לביצוע נכון של פיפטציה - ולא משנה כמה מנוסה המדען.


יש להקפיד על הטכניקה הנכונה כאשר מחלקים נוזלים באופן ידני. כמה משגיאות הפיפטציה הנפוצות ביותר קשורות לשימוש רשלני בקצות פיפטה (טיפים), קצב או תזמון לא עקביים וכן טיפול לא נכון בפיפטור.


לפעמים גם המדען המנוסה ביותר עלול לבחור את הפיפטור הלא נכון למשימה. כמה מהשגיאות הנפוצות כוללות אי שימוש בנפח הנכון עבור משימה ספציפית, וכן שימוש בפיפטור דוחק-אוויר לטיפול בנוזל לא מימי. כשמדובר בנוזלים צמיגים, יש להשתמש תמיד בפיפטור בעל דחיקה חיובית.


לפני שמגיעים להליכי פיפטציה ספציפיים, יש להבין ולזכור כמה מושגים כלליים. בכל פעם שמתחילים לעבוד במשך היום, יש לדעת איזה ניסוי עושים, עם אילו נוזלים עובדים ואיזו תפוקה רוצים לפני בחירת הפיפטור.


באופן מציאותי, לאף מעבדה אין את כל הפיפטורים האפשריים, אבל אם נבדוק אילו כלים זמינים במעבדה ובמחלקה, אנו עשויים לקבל מושג טוב יותר אילו כבר קיימים או אילו חדשים כדאי לרכוש.


התכונות הזמינות בפיפטורים של היום משתרעות מעבר למכשיר עצמו. ההתקדמות בטיפול בנוזלים אפילו מאפשרת למשתמשים לחבר אותם לענן. עם קישוריות זו, משתמש יכול להוריד פרוטוקולים או ליצור פרוטוקולים מותאמים אישית. ניתן אפילו ללכוד נתוני פיפטציה בענן, וזו דרך אחת לזהות כל פספוס ולשפר את תהליך הפיפטציה, במיוחד על ידי מעקב אחר רמת הדיוק או היעדרו.


עם הציוד הנכון ביד, האתגר הבא הוא לבצע את הצעדים הנכונים.


צעדים בסיסיים לשימוש נכון בפיפטורים


כשמדובר בפיפטור דוחק אוויר, השלבים הבאים מגדילים את הסבירות למדידה מדויקת וחוזרת של נפח מסוים:


  • הגדירו את הנפח הרצוי.

  • לחצו על הבוכנה.

  • טבלו את הטיפ לעומק הנכון, שיכול להשתנות לפי הפיפטור והטיפ עצמו, ותנו לבוכנה לנוע בצורה חלקה למצב המנוחה שלה.

  • המתינו כשנייה אחת עד שהנוזל יזרום לקצה.

  • הניחו את הפיפטור - המוחזק ב-10-45 מעלות - כנגד דופן תא הקליטה, ולחצו בצורה חלקה את הבוכנה עד לתחנה הראשונה.

  • המתינו שנייה אחת ולאחר מכן לחצו על הבוכנה עד לעצירה השנייה.

  • החליקו את הטיפ על דופן הכלי כדי להסיר את הפיפטור.

  • אפשרו לבוכנה לחזור למצב המנוחה שלה.


פיפטור אלקטרוני / חשמלי הופך חלק מהשלבים הללו לאוטומטיים. הוא כולל בדרך כלל תצוגה דיגיטלית לכוונון הנפח, וכן בוכנה ממונעת לשאיבה וניפוק שעושה ביעילות את כל העבודה. הוא מגיע גם עם תוכניות עבודה שימושיות מראש ומצבים מותאמים אישית, בהם החוקרים יכולים ליצור במהירות פרוטוקולים משלהם.


איך לבצע פיפטציה מקצועית




1. הרטיבו מראש את הטיפ


יש לשאוב ולשחרר כל נוזל לפחות שלוש פעמים, לפני שאיבת דגימה למסירה. אידוי בתוך הטיפ עלול לגרום לאובדן דגימה משמעותי לפני המסירה. הרטבה מוקדמת מגבירה את הלחות בתוך הטיפ, ובכך מפחיתה כל וריאציה באידוי הדגימה. שימוש באותו טיפ כדי לספק דגימות מרובות ללא הרטבה מוקדמת, יכול לגרום לנפח נמוך יותר בדגימות הראשונות. הצורך להרטיב מראש עולה כאשר עובדים עם דגימות נדיפות (כלומר, ממיסים אורגניים).


2. טבלו את הטיפ לעומק המתאים במהלך השאיבה


לפני השאיבה, טבלו את הטיפ בצורה מספקת מתחת למיניסקוס (פני השטח המקומרים של הנוזל). יש לטבול פיפטורים בנפח גדול (1-5 מ"ל) ב-5-6 מ"מ, בעוד שפיפטורים בנפח קטן יותר יש לטבול ב-2-3 מ"מ. טבילה קטנה מדי, במיוחד עם פיפטורים בנפח גדול, עלולה להוביל לשאיבת אוויר. טבילה רבה מדי עלולה לגרום לדגימות להיצמד לחלק החיצוני של הטיפ. נגיעה בתחתית המכל עם הטיפ עלולה להגביל את השאיבה.


3. הפסיקו לאחר שאיבה


השאירו את הטיפ בנוזל למשך כשנייה אחת לאחר שאיבת הדגימה. לוקח רגע עד שהנוזל בטיפ מסיים לנוע לאחר שהבוכנה נעצרת. אם לא תעצרו, הדבר יוביל לנפח נמוך מדי. עשו את ההפסקות הללו בצורה עקבית ככל האפשר.


4. השתמשו בלחץ ובמהירות עקביים בבוכנה


לחצו כלפי מטה ושחררו את הבוכנה בצורה חלקה ועקבית. נסו להפעיל את אותם לחץ ומהירות בעת השאיבה והחלוקה של כל דגימה. פעולות הניתנות לחזרה מייצרות תוצאות שניתן לשחזר שוב ושוב.


5. משכו את הפיפטור ישר החוצה


במהלך שאיבת דגימה, תמיד החזיקו את הפיפטור בצורה אנכית והימנעו מלגעת בדפנות המכל. לאחר שאיבת דגימה, משכו את הפיפטור ישר מהנוזל ממרכז המכל. טכניקה זו חשובה במיוחד בעת פיפטציה של נפחי נוזלים קטנים (<50 μL). החזקת הפיפטור בזווית, בעת הוצאתו מהמדגם, משנה את נפח השאיבה. נגיעה בדפנות המכל עלולה לגרום לנידוף ולאובדן נפח עקב מתח פני השטח.


6. בדקו את הטיפ לפני חלוקת דגימה


לפני הנפקה, הסירו בזהירות טיפות בצד החיצוני של הטיפ עם מטלית נקייה, והקפידו להתרחק מהפתח. חומר סופג יונק במהירות את הדגימה מהטיפ אם הוא בא במגע בפתח, וניגוב מיותר של הטיפ מגביר את האפשרות לאובדן דגימה, לכן יש להיזהר.


7. בדקו את הטיפ לאחר חלוקת דגימה


תוך כדי חלוקת דגימה, מקמו את הטיפ כך שייגע בצד המכל כדי לספק שאריות של דגימה שנותרה בטיפ. שמרו את האגודל לחוץ על המעצור השני של הבוכנה, והסירו את הטיפ כדי למנוע שאיבת דגימה מחדש לקצה הפיפטור. ודאו שאתם רואים את הדוגמה יוצאת מהטיפ.


8. השתמשו בפיפטציה במצב סטנדרטי


בדגימות מימיות, בחרו "מצב רגיל" (או Forward) במקום "מצב הפוך". אפשר לשקול שימוש בפיפטציה הפוכה עבור דגימות צמיגות או נדיפות במיוחד. אם נעשה שימוש בפיפטציה הפוכה עם דגימות מימיות רגילות, הפיפטור נוטה לספק יותר מהנפח המכויל. מצד שני, שימוש בפיפטציה הסטנדרטית עם דגימות צמיגות או נדיפות - עלול לגרום לתת-מסירה.


9. השתמשו בפיפטור המתאים


חשוב להשתמש בפיפטור עם טווח נפח הקרוב ביותר לנפח שאתם מתכננים לשאוב ולחלק. דיוק הבדיקה ישתפר אם יש הבדל קל בין הנפח המינימלי של הפיפטור לנפח הנבדק. לדוגמה, אם צריך לפזר 15 µL, פיפטור של ​​1 מ"ל יהיה הבחירה השגויה, ואילו פיפטור של ​​20 µL יהיה אידיאלי.


10. השתמשו בטיפ הנכון


השתמשו בטיפים באיכות גבוהה, המיועדים לשימוש עם פיפטורים ספציפיים. ברוב המקרים, עצות היצרן מתפקדות היטב. מותגים חלופיים מקובלים גם אם הביצועים שלהם הוכחו עם דגם פיפטור ספציפי. טיפים ופיפטורים לא מתאימים עלולים לגרום לאי דיוק, חוסר דיוק או שניהם. טיפים איכותיים מספקים אטימה ללא צורך בכוח מופרז, עשויים מחומרים מעולים וללא פגמי דפוס, ובכך מבטיחים אספקת נוזלים אמינה.


11. אזנו את טמפרטורת הסביבה


אפשרו לנוזלים ולציוד להגיע לשיווי משקל בטמפרטורת הסביבה, לפני שתתחילו בפיפטציה. נפח הדגימה הנמסרת על ידי פיפטורים דוחקי אוויר, משתנה בהתאם ללחץ האוויר, הלחות היחסית ולחץ האדים של הנוזל, כולם מאפיינים תלויי טמפרטורה. עבודה בטמפרטורה קבועה אחת, ממזערת את השינוי הזה ומשפרת את הדיוק הכללי.


12. צמצמו את השימוש בפיפטור


החזיקו את הפיפטור בצורה רופפת, החזירו אותו למעמד או הניחו אותו כאשר אינכם עובדים איתו. יש ללבוש תמיד כפפות כדי להפחית את העברת חום הגוף לפיפטור, ולהימנע מטיפול בטיפים או במכלים של דגימות שטרם עברו פיפטציה. חום הגוף המועבר במהלך הטיפול משבש את שיווי המשקל בטמפרטורה, מה שעלול להוביל לשינויים באספקת נפחי הנוזל.


10 צפיות0 תגובות

Comments


bottom of page